تشخیص سریع اسپور عامل سیاه زخم به روش مولکولی

نویسندگان

  • احمدی , علی مرکز تحقیقات بیولوژی مولکولی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه اله (عج)
  • پروین , شهرام مرکز تحقیقات بیولوژی مولکولی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه اله (عج)
  • پورعلی , فاطمه مرکز تحقیقات بیولوژی مولکولی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه اله (عج)
  • کرمی , علی مرکز تحقیقات بیولوژی مولکولی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه اله (عج)
چکیده مقاله:

زمینه و اهداف: باسیلوس آنتراسیس باکتری اسپور دار، گرم مثبت، هوازی و عامل بیماری سیاه زخم است. در سال های اخیر از این باکتری در حملات بیوتروریستی استفاده شده است. اسپور باسیلوس آنتراسیس نسبت به عوامل فیزیکی و شیمیایی بسیار مقاوم می باشد. برای تشخیص سریع اسپور این باکتری به روش های مولکولی، به اسنخراج ژنوم با شکستن اسپور نیاز می باشد. هدف از این مطالعه تشخیص سریع مولکولی D‏NA باسیلوس آنتراسیس به روشMultiplex PCR با شکستن سریع اسپور به روش فیزیکی در زمان بسیار کوتاه و بدون استخراج ژنوم است. روش بررسی: اسپورباکتری غیر بیماریزای سیاه زخم یا سویه استرن (سویه واکسن باسیلوس آنتراسیس) توسط سیستم (BioSpec Products, In.) Mini Bead Beater-8 با استفاده از بید های 0.1 میلی متری در 5000 دور در دقیقه شکسته و استخراج شد. تشخیص به روش PCR Multiplex با استفاده از 3 جفت پرایمر صورت گرفت. PCR سه قطعه DNA با اندازه های مورد انتظار را تولید نمود که در ژل آگاروز الکتروفورز آنالیز شد. جهت تعیین حد تشخیص و اختصاصیت از رقت های مختلف اسپور به روش CFU/ml و باکتری های دیگر همین جنس نیز استفاده گردید. یافته ها: اسپورهای باســیلوس آنتراسـیس در عرض سـه دقیـقه شکـست شـد. با استـفاده از پرایـمرهای اختـصاصی و Multiplex PCR، محصولات به دست آمده شامل سه قطعه (1083bp، 385bp، 164bp) در ژل آگارز 2 درصد آنالیز شد. با استفاده از آنزیم برش دهنده Hind IIIمحصول (1083bp) تایید گردید. حد تشخیص بر اساس روش CFU/ml، رقت 1.512 از سوسپانسیون با 7680/ml یا 7 اسپور در میلی لیتر اسپور معین شد. نتیجه گیری: نـتایج بهـینه سـازی نشـان داد شـکستن به روش فیـزیـکی با اسـتفاده از ذرات شیـشه و دستـگاه Bead Mill Homogenization از سرعت لازم برخوردار می باشد. بعد از شکست در مدت 3 دقیقه، نیازی به استخراجDNA نیست. با این روش، ما توانستیم به طور سریع، اختصاصی و با حساسیت بالا اسپور باکتری باسیلوس آنتراسیس را در نمونه ها تشخیص دهیم. 

برای دانلود باید عضویت طلایی داشته باشید

برای دانلود متن کامل این مقاله و بیش از 32 میلیون مقاله دیگر ابتدا ثبت نام کنید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

تشخیص سریع مولکولی لیستریامنوسیتوژنز به روش PCR با استفاده از ژن hlyA

زمینه و اهداف: در حال حاضر روش استاندارد برای تشخیص لیستریا مونوسیتوژنز کشت می باشد. به علت این که در خوراک دام از آنتی بیوتیک استفاده می شود و این باکتری داخل سلولی می باشد حساسیت کشت به شدت کاهش می یابد. به علاوه، تشخیص با این روش بیشتر از 36 ساعت طول می کشد. لذا، دست یابی به آزمونی که بتواند در هر شرایطی وجود لیستریا مونوسیتوژنز را در نمونه بالینی نشان دهد، ارزشمند می باشد. هدف این مطالعه ت...

متن کامل

تشخیص مقاومت به افلوکساسین با روش مولکولی سریع Allele Specific PCR ‏در مایکوباکتریوم توبرکلوزیس

  مقدمه : مقاومت به فلوروکینولون‏ها در بیماری سل رو به گسترش است. ‏تشخیص مقاومت به روش کشت خلط دو ماه به طول می‏انجامد. ‏مطالعه حاضر، به منظور طراحی روشی برای تشخیص سریع مقاومت سویه ‏ها ی کلینیکی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس به افلوکساسین انجام شد.   مواد و روش‏‏ها: در این مطالعه، ‏ DNA ‏های استخراج شده از 41 سویه کلینیکی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس ‏حساس و مقاوم ‏به افلوکساسین موجود در بانک DNA مرکز ...

متن کامل

تشخیص سریع موتاسیون در ژن عامل مقاومت به ریفابوتین در سویه های کلینیکی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس به روش Allele Specific PCR

Background and purpose: Molecular detection of antibiotic resistance in clinical strains of M.tuberculosis is of great importance. In this study, we developed a method for rapid detection of mutations resistant to the rifabutin antibiotic resistant gene. Material and methods: In this study 40 clinical isolates of M.tuberculosis including 12 resistant and 28 susceptible isolates to rifabutin we...

متن کامل

تشخیص سریع عامل بیماری لوک اروپایی (ملیسوکوکوس پلوتونیوس) در کلنی های زنبور عسل با روش PCR

مقدمه : بیماری لوک اروپایی، بیماری نوزادان زنبور عسل می باشد. این بیماری از جمله بیماریهای خطرناک برای کلنی های زنبور عسل محسوب می شود و در اثر باکتری گرم مثبت  ملیسوکوکوس پلوتونیوس ایجاد می گردد. این بیماری به صورت گسترده ای در جهان پراکنده است و در برخی از نواحی مشکلات فزآینده ای را ایجاد می نماید. پیشرفت های اخیر در تکنولوژی مولکولار، تشخیص هویت باکتری را بسیار سهل و آسان نموده است و تکنولوژ...

متن کامل

تشخیص سریع مولکولی سالمونلا تیفی به روش PCR با استفاده از ژن invA در نمونه های مواد غذائی

مقدمه: به دلیل این که سالمونلا تیفی یک پاتوژن روده ای مهم و آلوده کننده آب و غذا می باشد، تشخیص سریع و دقیق آن در آب و مواد غذائی بسیار حائز اهمیت است. امروزه تشخیص سریع باکتری های بیماری زا با تکنیک های نوین در مواد غذایی از اهمیت زیادی برخوردار است. هدف از انجام این مطالعه جداسازی سالمونلا تیفی در مواد غذایی آلوده با روش PCR با استفاده از ژن invA بوده است. مواد و روش ها: بعد از استخراج DNA ب...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید

ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده

{@ msg_add @}


عنوان ژورنال

دوره 3  شماره 1

صفحات  10- 17

تاریخ انتشار 2009-06

با دنبال کردن یک ژورنال هنگامی که شماره جدید این ژورنال منتشر می شود به شما از طریق ایمیل اطلاع داده می شود.

کلمات کلیدی

کلمات کلیدی برای این مقاله ارائه نشده است

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023